Новый метод активизации стволовых клеток

Новый метод  активизации стволовых клеток

Известно, что молодая клетка, вступая в контакт со старой, делится с ней своей генетической информацией посредством ДНК, тем самым восстанавливая и «омолаживая» ее. C возрастом активность стволовых клеток кожи снижается, тем самым замедляется образование молодых клеток и самообновление тканей. Исходя из этого, можно сделать вывод, что, если запустить процесс пролиферации стволовых клеток, начнется миграция молодых клеток в стареющие поврежденные кожные ткани, которая в конечном итоге приведет к их частичному восстановлению. Недавние исследования показали, что прекрасным методом воздействия на стволовые клетки стареющей кожи является специальный пептид P 199, подтвердивший свою способность «подталкивать» их к пролиферации и самообновлению, то есть запускать биологические процессы, обратные старению.

Постоянное воздействие неблагоприятных факторов окружающей среды приводит к образованию большого количества свободных радикалов, которые поражают митохондрии, запуская, таким образом, процесс апоптоза – «запрограммированной» гибели клеток. При этом гибнут не только патологически измененные клетки: повреждение митохондрий активирует запуск апоптического пути в здоровых, нормально функционирующих клетках.

ПРИЧИНЫ СТАРЕНИЯ

Помимо негативного внешнего воздействия, в процессе старения в клетках происходят и внутренние изменения, в том числе уменьшается выработка эндогенного антиоксиданта – коэнзима Q, защищающего митохондрии от окислителей. Соответственно, естественная система защиты клеток от действия свободных радикалов теряет свою эффективность. Вместе с тем продолжается энергообразование, а также перенос электронов в митохондрии и образование активных форм кислорода. И именно данное повреждение митохондрий (то есть приток ионов кальция, снижение цитохрома C, каспазный каскад) запускает программу апоптоза в клеткахкожи. В результате этих процессов большое количество жизнеспособных клеток с большим числом неизрасходованных клеточных делений преждевременно умирает, что создает основу преждевременного старения кожи. Таким образом, для замедления потери клеток, для обновления их популяции и улучшения состояние стареющей кожи необходимы пролиферация, дифференциация и самообновление стволовых клеток.

ПЕПТИД Р 199: ХАРАКТЕРИСТИКИ И ИССЛЕДОВАНИЯ

Вызывать эпидермальную пролиферацию стволовых клеток, а также обновление кератиноцитов и фибробластов способен пептид P 199, скопированный с пептида Вартонова студня (желе Вартона). Р 199 – это синтезированный, подобно человеческому, пептид, в патентном удостоверении которого значится: «Р 199 – это компонент для терапевтической регенеративной мезотерапии, проверенный и эффективный, являющийся безопасным методом борьбы со старением кожи». В составе препарата Meso-Wharton P 199, содержащего пептид P 199, находится эффективная доза активных ингредиентов, присутствующих в соотношении, равном тому, что содержится в Вартоновом студне: интерлейкин-6, интерлейкин-1, интерлейкин-8, фактор роста фибробластов (FGF), инсулиноподобный фактор роста (IGF-1), эндотелиальный фактор роста, фактор адгезии ICAM-1, VCAM-1, коллаген, желатиназа (ММР-2), желатиназа В (ММР-9) и гиалуроновая кислота.

Обнаруженный в результате фракционирования и очистки, а затем скрининга матричных компонентов Вартонова студня на активность стволовых клеток эмбриональный пептид подвергся комплексному запатентованному процессу, включающему хроматографическую очистку и электрофорез в полиакриламидном геле. После того как пептид был расшифрован, благодаря определению последовательности аминокислотных остатков и клонированию была получена его синтетическая копия, рекомбинантная версия-пептид Р 199.


Табл. 1.
Результаты исследования эксплантатов Фото 1. Пациентка М., 48 лет, комбинированный тип старения лица. Клиническая картина до проведения терапии и состояние кожи периорбитальной области после проведения 6 процедур

Первоначальное тестирование пептида Р 199 было проведено с целью описания сигнального каскада, активизированного после нанесения P 199 на кожу лица. Применялась полимеразная цепная реакция. Результаты оценивались с помощью t-критерия Стьюдента, сравнивались с исходными и контрольными данными. Экспрессия генов факторов роста включала: фактор роста кератиноцитов, фактор роста фибробластов, эпидермальный фактор роста (EGF), EGF-R, c-RAS, с-SRC, c-MYC, фактор роста эндотелия. Изменение в экспрессии факторов роста и цитокинов включало: фактор роста кератиноцитов, фактор роста фибробластов, эпидермальный фактор роста, фактор роста эндотелия, интерлей-
кин-1 (IL-1), IL-3, IL-6, IL-8. Результаты исследования показали, что P 199 является эффективным средством активации стволовых клеток, пролиферации и дифференциации клеток в стареющей и поврежденной взрослой коже с целью восстановления новых клеток в истощенной ткани.

Исследование эксплантатов проводилось на материале, взятом у 20 белых лабораторных мышей до и после периода проведения исследований, которые длились 5 недель. Мыши были равномерно распределены в испытательную и контрольную группы, по 10 особей в каждой. Пептид Р 199 исследовался в виде крема. Образцы для лечения сравнивались с контрольными образцами и измерялись на внутриклеточную экспрессию маркера стволовых клеток: Oct4/PouF51 (транскрипционный фактор Oct4, POU-домен, класс 5, транскрипционный фактор 1). Через 5 недель образцы биопсии подвергались гистохи- мическому анализу, который показал, что в контрольной группе было представлено 1,8% стволовых клеток среднего размера, тогда как в группе Р 199 было зафиксировано 6,1% стволовых клеток среднего размера, то есть процентное увеличение составило +339%. Аналогичная процедура была проведена для исследования числа поверхностных маркеров стволовых клеток – стадиеспецифических эмбриональных антигенов-3 и -4 (SSEA-3, SSEA-4) и кератиносульфатных антигенов TRA-1-60. Результаты представлены в таблице 1 и являются для P 199 статистически значимыми, по сравнению с контрольной группой, для каждого из трех маркеров стволовых клеток, а также наглядно показывают, что лечение Р 199 привело к значительному увеличению в коже количества стволовых клеток и усилению их активности.

Для исследования влияния Р199 на способность к пролиферации эпидермальных стволовых клеток в человеческой коже были взяты образцы биопсии с добровольного согласия пациентов, перенесших подтяжку кожи лица. Гистологическое окрашивание было использовано для определения изменений в активности стволовых клеток на основе конкретных маркеров стволовых клеток кожи человека, в том числе B-1-интегрина, цитокератина-15 и цитокератина-19. Участие в исследовании приняли 15 пациентов в возрасте от 35 до 45 лет. Образцы, обработанные P 199, дали статистически значимые результаты, показывающие в 2,4 раза больше клеток с положительным результатом теста
на цитокератин-19 и в 3,5 раза больше клеток с положительным результатом теста на цитокератин-15. Результаты также отображают повышение экспрессии в выражении B-1-интегрина в образцах для лечения по сравнению с контрольными образцами, что, в свою очередь, снова доказывает значительное увеличение активности стволовых клеток при использовании P 199. Для изучения действия Р 199 на неосинтез коллагена в человеческой коже у добровольцев была взята биопсия кожи из околоушной области с одной стороны лица, после чего они ежедневно применяли для лечения крем с пептидом P 199 на обеих сторонах лица. Через 28 дней лечения была взята вторая биопсия кожи – из околоушной области с противоположной стороны. Результаты биопсии, взятой после лечения, сравненные с образцами первой биопсии, показали значительные улучшения в сосочковом и сетчатом слоях дермы, состоящих из новых коллагеновых волокон с параллельным расположением друг относительно друга. Был сделан вывод, что Р 199 улучшает функциональные возможности фибробластов, стимулирует синтез новых, лучше организованных коллагеновых волокон, улучшая морфологию дермы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленные данные свидетельствуют о том, что действие Р199, направленное на восстановление кожи, превосходит действие пептидов, не имеющих характеристик стимулирования стволовых клеток, свойственных только человеческому эмбриональному белку.
— P 199 активирует обновление кератиноцитов и фибробластов в истощенной коже путем увеличения пролиферации мультипотентных стволовых клеток;
— в результате лечения пептидом P199 происходит восстановление неосинтеза коллагена, обновление внеклеточного матрикса и морфологии кожи;
— безопасность MesoWharton Р199 протестирована, и препарат признан предпочтительным лечением старения кожи;
— лечение препаратом Meso-Wharton P199 обратит вспять признаки старения кожи, в результате чего она приобретет более молодой и здоровый вид.